豬乙型腦炎病毒抗體快速檢測卡

豬乙型腦炎病毒抗體快速檢測卡?

乙型腦炎病毒（Japanese B encephalitis virus, JBEV）是一種危害嚴重的人獸共患病毒，對人類健康和畜牧業發展都會造成極大威脅。及時檢測對于預防和控制感染有重要意義。

實驗原理：采用滲濾式免疫膠體金技術，利用金顆粒作為示蹤劑，選擇性捕捉標本中特異性抗體。斑點反應板上的固相抗原特異地與標本中的特異性抗體結合形成復合物，膠體金標記的第二抗體(IgG、IgM、IgA)再與復合物結合，形成肉眼可見的紅色線條。

【樣品處理】
1. 取一定量的去脂肪組織樣本，用剪刀剪碎；
2. 稱取 2g 剪碎樣本于 50 ml 離心管中，并加入 4ml 去離 子水， 0.5ml  1M  鹽酸 ， 0.1ml  樣 本衍生化試劑 1，,0.1ml 衍生化試劑 2，充分混合 3min；
3. 60℃水浴條件下孵育 1h；
4. 取出后加入 5ml 0.1M 磷酸氫二鉀，0.4ml 1M 氫氧化 鈉，倒入一瓶提取劑，充分混合 1min ，4000 轉/分鐘，離心 5min；
5. 移取上層溶液 3ml 于 5ml 離心管中，60℃下空氣吹 干；
6. 向吹干的試管中加入 1ml 凈化劑，加蓋振蕩 1min，然 后加入 0.5ml 復溶液，充分混勻，4000 轉/分鐘，離心1min（或靜置至明顯分層）；
7. 吸取 0.1 毫升下層溶液，待檢；
 

【使用步驟】 在進行測試前先完整閱讀使用說明書，使用前將試劑板和待檢樣本溶液恢復至室溫（20℃~30℃）。
1.從原包裝袋中取出試劑板，水平放置于觀察者正面， 如上圖右側所示（打開后請立即使用）；
2.吸取待檢樣品溶液 100 微升于金標微孔中，用小滴管 吹打*溶解孔內紅色物質，等待反應 5 分鐘；
3.吸取孔內所有溶液滴加到加樣孔（見上圖）中，加樣 后開始計時；
4. 結果應在 5～8 分鐘讀取，其他時間判讀無效。
 

【結果判斷】
1. 陰性（－）： T 線顯色（檢測線，靠近加樣孔一端）比 C 線（對照線）深或一樣深，表示樣品中呋 喃它
酮代謝物濃度低于檢測限或不含呋喃它酮 代謝物。
2. 陽性（＋）： T 線顯色比 C 線淺，或 T 線無顯色，表示樣品中呋喃它酮代謝物殘留濃度高于檢測限，T 線顯色比 C 線越淺，表示樣品中呋喃它 酮代謝物殘留濃度越高。
3.無效：未出現 C 線，可能是操作不當或試劑板已失 效。應再次閱讀說明書，并用新的試劑板重新 測試。代謝物濃度低于檢測限或不含呋喃它酮 代謝物。
4. 陽性（＋）： T 線顯色比 C 線淺，或 T 線無顯色，表示樣品中呋喃它酮代謝物殘留濃度高于檢測限，T 線顯色比 C 線越淺，表示樣品中呋喃它 酮代謝物殘留濃度越高。
5.無效：未出現 C 線，可能是操作不當或試劑板已失 效。應再次閱讀說明書，并用新的試劑板重新測試。

組織檢測步驟：
  1、將樣本魚蝦蟹、畜禽肉、內臟等去皮去脂肪,用均質器均質樣本，稱取3±0.05g均質物至15ml離心管中。
  2、依次加入4ml蒸餾水、0.5ml試劑A和0.6ml衍生化試劑，振蕩混勻，在65℃水浴中孵育30min。
  3、依次加入1ml試劑B、0.4ml試劑C和1瓶提取劑（4ml），振蕩混勻。
  4、在室溫下（20-25℃）4000r/min離心5min，取2ml上層有機相至5ml離心管中，在50-60℃水浴中用氮氣（或公司提供的空氣吹干儀）吹干。
  5、取1ml凈化劑溶解干燥物，再加入0.5ml試劑D振蕩混勻，在室溫下（20-25℃）4000r/min離心2min，待檢。

?如使用全血標本檢測，標本的移動速度可能較慢，必要時可在加樣約1分鐘后，在加樣孔內滴加1滴PBS作輔助液，以促進標本移動。

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